2.1.6. PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Medio PCA

_ Extracto de levadura 2.5 g

_ Glucosa 1 g

_ Triptona 5 g

_ Agua 1 litro

_ Agar 15 g

_ pH 7

_ Extracto de levadura 2 g

SOLUBILIZADORES DE FOSFATO

_ Glucosa 20 g

_ Fosfato insoluble 2 g

_ Agar 18 g

_ Agua destilada 1 litro

_ Extracto de papa 4 g

PDA

_ Glucosa 20 g

_ Agar 15 g

_ Agua destilada 1 litro

_ pH 5.6

TY

_ Triptona 5 g

_ Extracto de levadura 3 g

_ CaCl2 2H2O 0.6 g

_ Agua destilada 1 litro

_ Agar 18 g

_ pH 6.8

_ CALDO TY: igual al anterior pero sin el agar

Medio EMA

 _ Manitol 10 g

_ K2HPO4 0.5 g

_ MgSO4.7H2O 0.2 g

 _NaCl 0.1 g

_ Extracto de levadura 1 g

 _Rojo congo 10 ml

_ Agua destilada 1 litro

_ Agar 18 g

http://www.fagro.edu.uy/~microbiologia/docencia/materiales%20teoricos/Medios%20de%20cultivo%20y%20esterilizacion.pdf

EJEMPLO DE PREPARACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO

MATERIAL POR EQUIPO:

- 2 mecheros ☻

- 1 agitador ☻

- 1 mosca (magneto) ☻

- 1 matraz de 500 mL ☻

- 1 balanza

- 1 espátula ☻

- 1 probeta de 250 mL ☻

- 10 cajas de Petri estériles desechables

- Masking tape

- Papel aluminio

- Plumón indeleble

- Trapo

- Reactivos para el medio de cultivo

EQUIPO

- Autoclave

PROCEDIMIENTO:

1.     Pesar los reactivos necesarios para preparar 250 mL de medio (por equipo).

2.     Ponerlos en el matraz.

3.     Con la probeta, medir 250 mL de agua destilada y añadirla al matraz con el polvo.

4.     Poner el matraz sobre el agitador con una mosca para que la suspensión se mezcle homogéneamente.

5.     Cuando la solución esté homogénea, retirarla del agitador, sacar la mosca y tapar con un pedazo de aluminio.

6.     La autoclave estará prendida previamente por la profesora. Con su ayuda, introduce tu matraz en el interior de la autoclave. Ciérrala siguiendo las indicaciones de(l/la)  maestro(a). Una vez que empiece a salir vapor, coloca la válvula en la autoclave, para que la presión comience a subir. Tiene que llegar hasta 15 lb/in2. A partir de este momento, deberás tomar el tiempo de 20 minutos. Deberás tener cuidado de que la presión de la autoclave, nunca rebase los 20 lb/in2, ni está por debajo de los 15 lb/in2. Esto se puede controlar conectando y desconectando la autoclave, según te indique la maestra.

7.     Transcurridos los 20 minutos, desconecta la autoclave. Comienza a abrir la válvula para liberar el vapor y que la presión comience a bajar. La autoclave puede abrirse únicamente cuando el manómetro marque cero. ¡Antes no ya que podría explotar!

8.     La autoclave se abre desde atrás, procurando que nadie quede de frente hacia donde se abre la tapa, ya que saldrá mucho vapor caliente que causa quemaduras. Una vez que se abrió con cuidado, con ayuda del trapo, sacar el matraz.

9.     Vaciar el medio en las cajas de Petri estériles siguiendo la técnica aséptica. Las cajas no pueden ser destapadas a menos que sea entre los mecheros o dentro de la campana de flujo laminar. Las tapas no se tocan por dentro con los dedos, ni se sacan del área de esterilidad.

10. Ya sólidas, se cierran adecuadamente y se etiquetan con el tipo de medio, equipo, grupo y fecha de elaboración. Guardar en el refrigerador para utilizar la siguiente práctica.

11. Vaciar el agua de la autoclave con cuidado de no quemarse.

http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/ClaseProcariontes/Alejandra/Pr%C3%A1ctica%204%20%20Medios%20de%20cultivo.pdf