La preparación de
medios de cultivo es sencilla pero incluye la manipulación de múltiples
sustancias. Esta preparación puede simplificarse mediante el uso de:
1.
Packs
listos para usar, disponibles para medios frecuentemente utilizados.
Habitualmente constan de medio base, sin reguladores.
2.
Elaboración
de soluciones stock mas concentradas, agrupando los compuestos en varias
soluciones stock, por ejemplo:
− Stock 1: Macros (x10)
− Stock 2: Sales de Calcio (x
10)
−
Stock 3: Micronutrientes (x
100)
−
Stock 4: Solución de hierro
−
Stock 5: Vitaminas (x 100)
−
Stock 6: Reguladores (cada
uno individualmente)(x 200)
Estas soluciones stock se conservan en nevera (stock 1, 2, 3 y 4) o
congelador (stock 5 y 6), según los compuestos que contengan, durante meses.
Algunas soluciones deben conservarse en oscuridad.
Algunos aspectos
relevantes al preparar el medio o las soluciones stock:
•
La cantidad de un
compuesto a añadir, en peso, es función de su grado de hidratación. Lo
relevante es mantener la molaridad del nutriente; a igual peso del compuesto,
cuanto mayor grado de hidratación menor molaridad del nutriente.
•
La concentración de una
solución stock está limitada por la solubilidad de sus compuestos y por las
interrelaciones entre ellos. La disolución de los compuestos no debe dar lugar
a reacciones entre ellos que causen algún tipo de precipitación o que
disminuyan su capacidad de incorporación al explanto.
•
Algunos compuestos, por
ejemplo muchos reguladores de crecimiento, son poco hidrosolubles. Para
preparar sus soluciones stock se disuelven en una pequeña cantidad de
soluciones ácidas o básicas (OHNa 1N, HCl 1N), solventes orgánicos (ej. DMSO),
o etanol, teniendo siempre presente el potencial efecto (toxicidad, efecto
sobre el pH, etc.) de dichos solventes.
•
Los compuestos
termolábiles deben ser incorporados mediante filtración al medio ya autoclavado
y a temperaturas cercas a la temperatura ambiente pare evitar su degradación.
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