2.1.4. COMPONENTES DEL MEDIO DE CULTIVO

Como ya se ha señalado, la provisión de elementos nutritivos en concentración adecuada, depende del conocimiento que se tenga de las condiciones del desarrollo en el hábitat natural.

La cantidad de sales y agua que se agregue a un medio de cultivo, se relaciona directamente con el pH, la fluidez y la presión osmótica que se le quiera brindar a los microorganismos. En función de la consistencia se puede clasificar a los medio el líquidos y sólidos. En el laboratorio, los medios de cultivo pueden presentarse en forma líquida, en cuyo caso se los denomina caldos, o en forma sólida si se le agrega agar al caldo. En cuanto a la esterilización, este procedimiento garantiza la destrucción de todos los microorganismos no deseados que se encuentran presentes durante la preparación del medio de cultivo. Si los componentes del medio son estables al calor se los lleva al autoclave (121 ºC, 15 minutos). Si se requiere sangre u otros componentes inestables, como antibióticos y compuestos fácilmente oxidables al calor, se los esteriliza por separado por otros procedimientos y se lo agrega al medio que ha sido esterilizado cuando se haya enfriado a 50 ºC. 

En cuanto a los inhibidores, cabe aclarar que un compuesto puede actuar como inhibidor para algunos microorganismos y no para otros.

CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los elementos citados a continuación, son los más frecuentemente usados en la preparación delos medios de cultivo, aunque pueden no ser los únicos e incluso alguno de ellos puede estar ausente de la preparación.

• −      Agua destilada o desionizada:  Libre de inhibidores del crecimiento.
• −  Agar: . El agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. Elcomponente dominante en el agar es un polisacárido, al que acompañan algunas impurezas yque se obtiene de ciertas algas marinas. Existe en rama o en polvo, se solubiliza en agua aebullición (funde hacia los 98°C) y al enfriarse forma un gel inodoro e insípido (se gelificaalrededor de los 42°C), dependiendo de su grado de pureza, por lo que tiene la ventaja de sersólido a la temperatura de incubación. Con la excepción de algunos microorganismosmarinos, el agar no es empleado como nutriente. Para preparar un medio sólido se le agregaagar al 12-18 %. Si se desea visualizar movilidad se usa agar blando se le agrega agar al 3 %.
• -        Extractos:  Para su preparación, ciertos órganos o tejidos animales o vegetales (por ejemplocarne, hígado, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor, y posteriormente concentradohasta la forma final de pasta o polvo. Estos preparados deshidratados son frecuentementeempleados en la confección de medios de cultivo. Ejemplos: extracto de carne, de levadura,de malta, etc. En el caso del extracto de carne en polvo o pasta, provee sustanciasnitrogenadas, minerales y vitaminas, mientras que el extracto de levaduras provee vitaminasdel grupo B, nitógeno y carbono.
• -     Peptonas: . Son mezclas complejas de compuestos orgánicos nitrogenados y sales mineralesque carecen de identidad química definida; se obtienen por digestión enzimática o química deproteínas animales o vegetales (soja, carne, gelatina, caseína, etc.). Las peptonas son muyricas en péptidos y aminoácidos, pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas ysales. Proveen proteosas, peptonas, polipéptidos y aminoácidos.
• -  Fluidos Corporales: . Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguíneo sonfrecuentemente añadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos patógenos. Lasangre no puede ser esterilizada y debe, por tanto, ser obtenida en condiciones asépticasdirectamente de un animal sano. Los fluidos corporales no solamente contribuyen confactores de crecimiento, sino también con sustancias que neutralizan inhibidores delcrecimiento de algunas bacterias.
• -  Sistemas amortiguadores: . Algunos componentes son incorporados al medio de cultivo paramantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano. Los microorganismosmás comunes son neutrófilos (el pH óptimo para su crecimiento está próximo a laneutralidad), y sales como fosfatos bisódicos o bipotásicos, o sustancias como las peptonas,previenen una desviación del pH.
• -        Indicadores de pH: Indicadores ácido- base se añaden a menudo a los medios de cultivo conobjeto de detectar variaciones del pH.
• -        Agentes reductores:  Cisteína, tioglicolato y otros son agentes reductores que se añaden a losmedios de cultivo para crear condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenesmicroaerófilos o anaerobios.
• -     Agentes selectivos: La adición de determindas sustancias al medio de cultivo puedeconvertirlo en selectivo (ver más adelante, clasificación de los medios de cultivo). Porejemplo, cristal violeta, sales biliares, azida sódica, telurito potásico, antibióticos, etc., a laconcentración adecuada, actúan como agentes selectivos frente a determinadosmicroorganismos.

http://es.scribd.com/doc/15024966/Cap-4-Medios-de-Cultivo


COMPONENTES DE UN MEDIO DE CULTIVO SON:

• Auxinas: ácido indol-acético (IAA), ácido naftalen-acético (NAA), ácido indol-butirico (IBA), ácido 2,4-Dicloro-fenoxi-acético (2,4-D)

• Citoquininas: benciladenina (BA), quinetina (KIN)

• Giberelinas: ácido giberélico (GA3)

• Ácido abscísico (ABA)

• Otros reguladores del desarrollo vegetal

De entre ellos es frecuente la adición de auxinas y citoquininas, en diferentes proporciones en función principalmente del tipo de diferenciación a inducir y del tipo de especie a cultivar. El uso de otros reguladores es mucho más ocasional.

Hidratos de Carbono:

• Monosacáridos: glucosa, fructosa, galactosa, manosa, arabinosa, ribosa, xilosa

• Disacáridos: sacarosa, maltosa, celobiosa, trehalosa, lactosa

• Trisacáridos: rafinosa

• Polisacáridos: almidón, celulosa De entre ellos el habitualmente utilizado en los medios de cultivo es la sacarosa.

Otros compuestos orgánicos:

• Aminoácidos

• Poliaminas Su utilización es diversa: para aportar una fuente suplementaria de nitrógeno en forma amina, producir procesos morfogénicos, etc. Suplementos de composición indefinida:

• Extractos de levadura, malta, carne, vegetales (patata, maíz, raíces y rizomas)

• Jugos de frutas u hortalizas (naranja, banano, piña, tomate, patata, leche de coco)

• Caseína hidrolizada Su uso es desaconsejable por no poder darse una composición precisa del extracto añadido, pueden resultar útiles sólo en casos concretos.

Compuestos específicos:

• Antioxidantes: ácido cítrico, ácido ascórbico

• Adsorbentes: carbón activo

• Controladores del potencial osmótico: polietilen-glicol, manitol Se puede precisar su aporte a los medios en condiciones concretas.

http://cv.udl.cat/cursos/76304/t5/t5.htm