Hibridación
Southernblot (SB). Necesita
de la extracción del ADN de la muestra con fenol/cloroformo y de la eliminación
de ARN y proteinas de la misma por digestión enzimática. Con la aplicación de
endonucleasas de restricción-la enzima Pst I es la mas utilizada, pues corta
los genomas en fragmentos de diferentes tamaños ofreciendo un patrón
característico en el gel de agarosa-el ADN se rompe, realizándose una
separación electroforética de los fragmentos en gel de agarosa los cuales
pueden ser visualizados con bromuro de etidio. El ADN se desnaturaliza y se
transfiere a una membrana realizándose una hibridación. El SB es el método de
referencia actual de. La especificidad de esta técnica es superior a cualquier
otra debido a la purificación extra del ADN por electroforesis. Además es el
único método que permite conocer si el genoma viral está en situación episomal
o integrado en el ADN celular. Las desventajas fundamentales del SB son su gran
complejidad técnica, duración de la misma y la necesidad de utilizar tejidos no
fijados, puesto que existen protocolos para material fijado, su sensibilidad se
reduce muy notablemente.
APUNTES DE LA CLASE DE BIOTECNOLOGIA VEGETAL
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